如果您想鑒定復(fù)雜樣品中可能有的多種分析成分，那么你對(duì)色譜柱的主要要求就是高分辨率。另一方面，如果你想將大量的感興趣的蛋白質(zhì)(如生物反應(yīng)器中產(chǎn)生的基于蛋白質(zhì)的生物制藥)與不需要的化合物分離，那么你對(duì)色譜柱的主要需求是產(chǎn)量。

　　這就是為什么分析柱傾向于高而薄，而用于大規(guī)模分離分析物的制備柱則傾向于更寬，以允許高流速。但是，雖然分辨率對(duì)于制備色譜柱的重要性不如對(duì)分析柱那樣重要，但它仍需要足夠高的分辨率，才能將感興趣的蛋白質(zhì)與不需要的化合物清晰分離。

　　不幸的是，實(shí)現(xiàn)所需的分辨率有時(shí)可能是相當(dāng)大的挑戰(zhàn)，因?yàn)閷挼闹睆皆试S感興趣的蛋白質(zhì)采取各種不同長(zhǎng)度的路線通過(guò)色譜柱。這將導(dǎo)致蛋白質(zhì)洗脫成寬帶，可能與一些不需要的化合物重疊。

　　科學(xué)家已經(jīng)開(kāi)發(fā)了各種技術(shù)來(lái)提高制備色譜的分辨率?，F(xiàn)在拉戈什(Raja Ghosh)和他在加拿大麥克馬斯特大學(xué)(McMaster University)的同事們提出了一種*不同的方法，其中包括*廢除色譜柱并用一個(gè)盒子替換它。

　　他們的想法是用制備色譜中使用的常規(guī)離子交換顆粒填充特制的長(zhǎng)方形盒子，體積為5mL至50mL。樣品和流動(dòng)相從一端引入盒子的頂部，而被分離的分析物則在相對(duì)端流出盒子的底部。這種安排使盒子具有與相同體積的制備柱相似的通量，但感興趣的蛋白質(zhì)通過(guò)盒子的路徑都是相似的長(zhǎng)度。

　　這是因?yàn)榈鞍踪|(zhì)都需要沿著盒子向下移動(dòng)相同的距離以達(dá)到遠(yuǎn)端的出口，從而提高分辨率。它們可以先向前然后向下，或先向下然后向前，或沿著任何變化路徑遷移，但它們都行進(jìn)相同的距離，并在窄帶中同時(shí)洗脫。

　　這種新型色譜盒，稱為長(zhǎng)方體填充床裝置，Ghosh和他的團(tuán)隊(duì)的對(duì)其進(jìn)行了測(cè)試，試圖用它分離三種蛋白質(zhì)的混合物。為了使其具有挑戰(zhàn)性，他們選擇了三種具有相似等電點(diǎn)的蛋白質(zhì)：核糖核酸酶A，細(xì)胞色素C和溶菌酶，這些都很難分離。事實(shí)上，傳統(tǒng)的制備柱很難做到這一點(diǎn)，而立方體填充床裝置將蛋白質(zhì)分離成三個(gè)清晰的峰。

　　他們的立方體填充床裝置，所測(cè)試的每種效率指標(biāo)都超過(guò)了制備柱。例如，對(duì)于分辨率的測(cè)量，計(jì)算出他們的裝置，當(dāng)流速為每分鐘0.5mL時(shí)，每單位床高度的理論塔板數(shù)為8636 / m，而制備柱的則為1480 / m。

　　所以，相當(dāng)有意味的是，Ghosh和他的團(tuán)隊(duì)通過(guò)思考如何改進(jìn)制備色譜的方法，卻想出了一個(gè)實(shí)際上可以取代制備色譜的應(yīng)用生物制藥純化的盒子。